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宫颈囊肿的病理与乳头病毒检测

2011-06-20 14:22来源:上海衡山虹妇幼医院

 

      【摘要】 目的 了解宫颈囊肿病理变化与人乳头状瘤病毒(HPV)亚型关系。方法 对计算机辅助细胞检测(CCT)诊断的71例不典型鳞状细胞、65例低度鳞状上皮内病变、17例高度鳞状上皮内病变及5例鳞状上皮细胞癌患者,在阴道镜下行宫颈多点活体组织病理学检测,同时采用聚合酶链反应(PCR)技术对宫颈脱落细胞及分泌物进行HPV6/11、HPV16/18检测;对经病理检查证实的宫颈囊肿中的凹空细胞分为Ⅰ型和Ⅱ型。结果 73例宫颈囊肿中,Ⅱ型凹空细胞的HPV16/18感染率为86.0%,明显高于Ⅰ型凹空细胞的16.7%(P<0.01)。含有Ⅱ型凹空细胞的低度鳞状上皮内病变中,HPV16/18感染率及病理性核分裂相发生率均为85.7%,明显高于Ⅰ型凹空细胞或单纯宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(P<0.01)。结论 根据组织病理检查发现有Ⅱ型凹空细胞,可以推测存在HPV16/18感染。含有Ⅱ型凹空细胞的低度鳞状上皮内病变与HPV16/18感染密切相关,核异型性好,伴病理性核分裂相,在病理诊断上具有重要意义。
 
  大量的流行病学研究显示,宫颈囊肿、癌前病变、宫颈癌三者密切相关。宫颈囊肿多表现为扁平湿疣,常伴宫颈上皮内瘤变(CIN)。随着分子生物学技术的发展,目前已经克隆了70余种人乳头状瘤病毒(HPV)亚型,其中高危型HPV与宫颈癌的发生、发展密切相关。若能从病理改变区别HPV感染亚型,对患者的临床处理具有重要意义。国外一些学者从病理表现的不同角度对此作了研究,结论不一[1,2]。但尚未见从凹空细胞的异型程度来区别HPV感染亚型的研究。本研究从凹空细胞的异型程度分析73例宫颈囊肿的病理特点,与聚合酶链反应(PCR)技术检测HPV亚型进行对比,探讨宫颈囊肿病理改变与高危型HPV感染的关系。
 
  资料和方法
 
  一、研究对象
 
  1996年9月至1998年2月,我院妇产科门诊行计算机辅助细胞检测(computer-assisted cytologic tech- nique, CCT)[3]6 005例,结果异常的患者158例为本研究对象,包括71例不典型鳞状细胞(ASCUS)、65例低度鳞状上皮内病变(LSIL)、17例高度鳞状上皮内病变(HSIL)及5例鳞状细胞癌,年龄22~60岁,平均(33±9)岁。
 
  二、方法
 
  1.病理标本取材:对158名患者均在阴道镜下行宫颈多点活检。活检组织用10%甲醛固定,石蜡包埋、切片、HE染色。病理片由有经验的3位病理医生共同阅片,较后诊断。
 
  2.病理诊断标准:宫颈鳞状上皮非典型增生及原位癌以Richart的CIN 3级为诊断标准。宫颈尖锐湿疣病理表现为:表层过度角化,棘层细胞及基底层细胞增生,表皮呈乳头状增生、伸长向表面突起,中表层见灶性凹空细胞。宫颈扁平湿疣表皮增生、平坦,中表层散在或成片分布凹空细胞。宫颈囊肿表中层凹空细胞的特点是:核周胞浆空泡化,细胞边缘尚留带状胞浆,核大、深染、核结构不清、核形不规则,常伴双核、多核[4]。凹空细胞的核表现有两种形态。一种核增大,但不超过底层细胞核的1倍,核形不规则,染色深,结构不清,可见双核,偶见病理性核分裂相(AMFs),即以放大400倍为高倍视野,病理性核分裂相1~2个/5高倍视野(HPFs),该种凹空细胞我们称之为Ⅰ型凹空细胞;另一种核为底层细胞核的2~3倍,可见双核、多核、畸形核或巨核,有的核结构清晰、可见核仁,有的染色质浓聚呈团块状,结构不清,核膜增厚,不连续;核浆比例失调;常有病理性核分裂相1~6个/5 HPFs,我们称之为Ⅱ型凹空细胞。宫颈囊肿伴CIN的病理特点[4]:CIN病变基础上表层及中层有HPV感染的特征性凹空细胞。
 
  3.HPV-DNA的检测:采用PCR方法。取患者宫颈脱落细胞和分泌物进行常规DNA提取。PCR反应管购自中山医科大学科技开发公司,扩增按下列条件:变性94℃ 45秒→退火55℃ 45秒→延伸72℃ 60秒,共35个循环,较后置于72℃保温5分钟。取10 靗扩增产物,用8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳30分钟后,溴乙锭染色,紫外灯下观察照相。设PBR322/BSTN1作标记物,大小为438bp的扩增产物为HPV6/11阳性;294bp的扩增产物为HPV16/18阳性。HPV6/11引物1为5′-GTGGGGGAACCTGTGC- CTGA-3′,引物2为5′-TGTACCATTTGGGGGAGGCG-3′;HPV16/18引物1为5′-TGGTGCCATGGACTTTAC- TACA3′,引物2为5′-TCAGAGGTAACCATAGAGC- CAC-3′。
 
  三、分析 学方法
 
  采用检验。
 
  结果
 
  一、病理检查结果
 
  158例中,73例为宫颈囊肿,其中单纯湿疣24例,宫颈囊肿伴CIN 49例,包括CINⅠ 15例、CINⅡ 20例、CINⅢ 14例。
 
  二、宫颈囊肿凹空细胞类型分布
 
  73例宫颈囊肿中,2例为尖锐湿疣,71例为扁平湿疣。根据核形态的差异,凹空细胞为Ⅰ型的有30例,Ⅱ型的有43例。
 
  1 Ⅰ型凹空细胞核增大,核形不规则、染色深、结构不清,偶见双核。HE×
 
  2 宫颈扁平湿疣伴CINⅠ,鳞状上皮增生、平坦,中表层可见Ⅰ型凹空细胞,基底层细胞轻度异型。HE×
 
  3 Ⅱ型凹空细胞核增大、结构清晰,可见核仁,核膜不连续。HE×
 
  4 Ⅱ型凹空细胞的畸形核。HE×
 
  5 为图4中畸形核的放大(↑)。HE×
 
  6 Ⅱ型凹空细胞,核为底层细胞核的2~倍,可见双核、多核,伴病理性核分裂(↑)。HE×
 
  7 鳞状上皮基底层出现CINⅠ,中表层可见Ⅱ型凹空细胞,伴病理性核分裂(↑)。HE×
 
  73例宫颈囊肿的病理形态类型与凹空细胞分型的关系
 
  三、凹空细胞与HPV亚型的关系
 
  30例含有Ⅰ型凹空细胞的宫颈囊肿病变中,5例HPV16/18阳性,占16.7%,6例HPV6/11阳性,占20.0%;43例含有Ⅱ型凹空细胞的宫颈囊肿病变中,37例HPV16/18阳性,占86.0%。
 
  四、低度鳞状上皮内病变病理性核分裂相与HPV16/18感染的分布
 
  病理诊断为单纯宫颈囊肿、湿疣伴CINⅠ和单纯CINⅠ在TBS分类中归于低度鳞状上皮内病变,共有49例。25例含有Ⅰ型凹空细胞,其中3例有病理性核分裂相(12.0%),4例HPV16/18阳性(16.0%)。14例有Ⅱ型凹空细胞,其中12例有病理性核分裂相(85.7%),12例HPV16/18阳性(85.7%);10例无凹空细胞为单纯CINⅠ,1例有病理性核分裂相,1例HPV16/18阳性。
 
  讨论
 
  凹空细胞是HPV感染在病理和细胞学上的特征性表现。1985年Gross等[5]描述了6种凹空细胞,概括了不同组织、不同器官HPV感染所致的凹空细胞的特点。凹空细胞异型程度不一,Boon等[6]认为可用中表层细胞核浆比及中底层细胞核大小比来描述。我们根据凹空细胞的核异型程度,将凹空细胞分为Ⅰ型和Ⅱ型,试图以此来区分HPV6/11和HPV16/18型感染。本研究结果显示,Ⅱ型凹空细胞与HPV16/18感染密切相关。因此,当宫颈组织中表层出现Ⅱ型凹空细胞时可以推测有HPV16/18感染。而Ⅰ型凹空细胞的HPV6/11和HPV16/18感染率无好差异(P>0.05),仅就Ⅰ型凹空细胞的表现,无法区分HPV感染类型。Ⅱ型凹空细胞常有畸形核和巨核(核大小超出底层细胞核的3倍以上,核染色深),可能是病毒的整合导致的非整倍体DNA细胞的形态表现。另外,Ⅱ型凹空细胞常伴病理性核分裂相,病理性核分裂相与高危型HPV感染密切相关[7,8],HPV16/18的E6蛋白与p53结合,促进p53蛋白的降解[9],导致损伤的DNA不能修复,细胞通过破坏纺锤体克服细胞周期调控点,从而表现出不对称的有丝分裂现象即病理性核分裂相。病理性核分裂相是病变恶性程度的标志,含有病理性核分裂相的良变易向恶性进展[10]。
 
  流行病学调查显示,低度鳞状上皮内病变中可检出所有嗜粘膜上皮类型的HPV,高危型HPV占相当比例。高危型HPV与病变进展密切相关,若能从病理上诊断出易发生进展的低度鳞状上皮内病变,则能对一些患者积极处理。我们着重分析病理诊断为低度鳞状上皮内病变的病理特点,含有Ⅱ型凹空细胞者HPV16/18型感染率和病理性核分裂相发生率好高于含有Ⅰ型凹空细胞者及不含凹空细胞的单纯CINⅠ。含有Ⅱ型凹空细胞的低度鳞状上皮内病变具有3个特点:(1)与HPV16/18型感染密切相关;(2)凹空细胞异型性好;(3)有病理性核分裂相。对含有Ⅱ型凹空细胞的低度鳞状上皮内病变患者,应积极治疗,密切随访。
 
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